Влияние тромбоцитарной аутоплазмы на местный иммунитет при лечении ран у лошадей в эксперименте

Гусева В.А., Семёнов Б.С, Кузнецова Т.Ш.

АННОТАЦИЯ. В статье рассматривается влияние лечения кожных экспериментальных ран у лошадей с применением тромбоцитарной аутоплазмы, полученной по технологии Plasmolifting – Animal, на количество иммунокомпетентных клеток кожи. Определено, что количественное соотношение Т-лимфоцитов (CD3+-клетки) и B-лимфоцитов (СD20+-клетки) биоптатов раневой поверхности подопытной группы животных на 11-е сутки комплексного лечения с применением тромбоцитарной аутоплазмы соответствует клеточному составу здоровой кожи. При этом в биоптатах раневой поверхности контрольной группы были выявлены избыточные скопления как В-, так и Т-лимфоцитов, что демонстрирует наличие выраженного воспалительного процесса. Использование тромбоцитарной аутоплазмы более эффективно по сравнению с общепринятым методом лечения в связи с активацией регенеративных процессов. Также, кроме ускоренной репарации поврежденных тканей, отмечается противовоспалительный эффект, основанный на биологическом действии тромбоцитарной аутоплазмы.

ВВЕДЕНИЕ

Применение тромбоцитарной аутоплазмы в медицинской практике основывается на том, что за счет высвобождения многочисленных различных факторов роста и других биологически активных молекул наблюдается активация процессов регенерации и восстановление поврежденных участков тканей. В гуманной медицине тромбоцитарную аутоплазму используют в косметологии, стоматологии, гинекологии, при лечении остеоартрозов [1, 4].

В ветеринарной практике применяли богатую тромбоцитами плазму с получением положительных результатов. При длительно незаживающих ранах конечностей у лошадей после лечения аутоплазмой в биопсийных препаратах были выявлены в большем количестве плотные пучки коллагена, ориентированные параллельно друг другу и вышележащему эпителию, в то время как в контрольных образцах тканей определяли меньшее количество коллагеновых волокон, ориентированных случайным образом [7]. Было определено, что применение богатой тромбоцитами плазмы способствует формированию сухожилия с нормальной морфологией и функциональностью без каких-либо серьезных побочных реакций [6].

К противопоказаниям применения собственной плазмы пациента можно отнести злокачественные новообразования, системные заболевания крови, аллергическую реакцию на коагулянт [1].

Следовательно, при показаниях тромбоцитарная аутоплазма может быть рекомендована к применению как стимулирующий регенерацию и противовоспалительный препарат.

При нарушении барьерно-защитных функций кожного покрова с целью предотвращения проникновения патогенов запускаются многоступенчатые восстановительно-регенеративные процессы, тесно связанные с функционированием клеток иммунной системы. Иммунологическая функция кожи в основном реализуется за счет различных популяций лимфоцитов (90% из них приходится на Т-лимфоциты, 10% – на В-лимфоциты). Лимфоциты способны к миграции из кровеносного русла или лимфатического сосуда в кожу, а также обладают аффинитетом к дерме, часть из них задерживается в ней, чтобы участвовать в иммунных реакциях [2, 3, 5].

В связи с вышесказанным представляет интерес определение содержания иммунокомпетентных клеток кожи при использовании тромбоцитарной аутоплазмы в сравнении с общепринятым методом лечения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Использовали две группы лошадей (контрольную и подопытную), в каждой группе было по 10 животных, кобылы и мерины в возрасте 5–10 лет, беспородные. Раны наносили в средней трети шеи, площадью 5 см2, предварительно подготовив операционное поле.

Тромбоцитарную аутоплазму получали по технологии Plasmolifting – Animal. Подопытной группе животных ежедневно наносили мазь «Левомеколь» и вводили тромбоцитарную аутоплазму в объеме 3 мл под дно раневой поверхности 1 раз в 3 суток, всего было сделано 4 процедуры. Раневую поверхность контрольной группы лошадей ежедневно обрабатывали только мазью «Левомеколь». Биоптаты раневой поверхности от животных обеих групп отбирали на 11-е сутки лечения и проводили иммуногистохимическое исследование для выявления Т-лимфоцитов (CD3+-клетки) и B-лимфоцитов (СD20+-клетки). Также оценивали биоптаты здоровой кожи средней трети шеи животного. С целью определения В-лимфоцитов используют метод розеткообразования с эритроцитами, которые обработаны антителами и комплементом EAC-РОК (с эритроцитами мыши). Для выявления Т-лимфоцитов используют метод спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ

В подопытной группе лошадей при использовании тромбоцитарной аутоплазмы в комплексе с мазью «Левомеколь» в биоптатах раневой поверхности при иммуногистохимическом окрашивании CD20+-клетки не обнаруживаются, заметны единичные CD3+-клетки в дерме, около 8–10 CD3+-клеток в поле зрения в базальном слое эпидермиса. Такую же картину наблюдали при иммуногистохимическом окрашивании биоптатов здоровой кожи. В контрольной группе лошадей при использовании только мази «Левомеколь» в результате иммуногистохимического окрашивания биоптатов раневой поверхности в базальном слое эпидермиса выявляются единичные CD3+-клетки, в дерме и на участках воспалительного гнойного процесса сильная инфильтрация CD3+-клетками, при полуколичественном анализе – около 60% от объема клеточного инфильтрата. В участках с менее выраженным воспалением количество CD3+-клеток меньше, но они образуют лимфоидные скопления вблизи сосудов. В этих скоплениях также обнаруживаются CD20+-клетки. В целом на препаратах выявляются множественные CD20+-клетки.

Из полученных данных видно, что при использовании тромбоцитарной аутоплазмы клеточный состав CD3+ и CD 20+ схож со здоровой тканью, в то время как в контрольной группе животных отмечено резкое увеличение обоих типов клеток, что говорит о наличии ярко выраженного воспалительного процесса.

При иммуногистохимическом исследовании биоптатов здоровой кожи не было выявлено наличие B-лимфоцитов и было отмечено наличие единичных Т-лимфоцитов (рис. 1,2).

Рисунок 1. Не выявлено наличие B-лимфоцитов и было отмечено наличие единичных Т-лимфоцитов

На 11-е сутки лечения в биоптатах подопытной группы лошадей отсутствовали В-лимфоциты (рис. 3) и встречались единичные Т-лимфоциты (рис. 4), в то время как в биоптатах контрольной группы были выявлены множественные В- и Т-лимфоциты (рис. 5, 6).

Рисунок 6. Множественные В- и Т-лимфоциты

Полученные данные свидетельствуют, что В- и Т-клеточный состав раневой поверхности подопытной группы животных соответствует клеточному составу здоровой кожи, при этом реакция с В-лимфоцитами отсутствовала и встречались единичные Т-лимфоциты. В биоптатах раневой поверхности контрольной группы лошадей были выявлены избыточные скопления как В-, так и Т-лимфоцитов, что демонстрирует наличие выраженного воспалительного процесса. Следует отметить, что результаты иммуногистохимического исследования коррелируют с данными, полученными при клиническом наблюдении за раневым процессом, при котором было установлено, что тромбоцитарная аутоплазма способствует купированию отечности и гнойного экссудата в ранах у лошадей.

Из проведенного исследования можно сделать вывод, что тромбоцитарная аутоплазма уменьшает выраженность воспалительной реакции, сокращает сроки заживления и может быть рекомендована как противовоспалительное средство при лечении ран у лошадей.